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ELISA是一種敏感性高、特異性強、重復(fù)性好的實驗方法，其具有試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等特點，但是在操作過程中還是需要注意下列問題：

1、切記在加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。

2、合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。

3、在吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

4、務(wù)必做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。

5、樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對其準確性。

6、為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。

7、未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃ 保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG 工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG 工作液。

8、ELISA試劑盒實驗中，加樣后及時放人孵箱，標(biāo)本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

9、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理 30 分鐘后廢棄。

10、人ELISA試劑盒洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

11、每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。

12、手工洗板時每次加入洗滌液后，應(yīng)靜置 15～30s，不要將一個酶標(biāo)孔中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。

13、對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。

14、沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水等配制溶液，切勿使用自來水。

15、在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，及時吸取標(biāo)準品溶液。

16、吸取液體時速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡。

為了得到準確有效的結(jié)果，大家在實驗操作過程中一定要注意這些問題。

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