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ELISA實驗的詳情解說
更新時間:2020-05-25   點擊次數(shù):1658次

 ELISA試劑盒 操作步驟:

1.加樣:標準品設定5個濃度點10個孔,每個濃度設定平行孔,加入50微升不同濃度的標準品,空白孔設定1個孔加入50微升蒸餾水(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔,在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

2.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

3.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

4.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

5.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

6.溫育:操作同2。

7.洗滌:操作同4。

8.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 

9.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。

10.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

ELISA試劑盒 實驗注意事項:

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間更好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線,好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

實驗計算:

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。  

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