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原位免疫PCR的原理

 
（一）基本原理

    Sano等（1992）利用基因工程的方法表達(dá)了A蛋白與鏈霉親和素的嵌合體分子獲得成功，建立了免疫PCR技術(shù)。這是一種新的抗原檢測系統(tǒng)，利用細(xì)胞工程和基因工程技術(shù)，巧妙地將抗原抗體反應(yīng)的特異性同PCR的敏感性相結(jié)合，通過構(gòu)建單克隆抗體與重組核酸的嵌合體分子，使得利用PCR技術(shù)檢測蛋白成為可能。隨后在免疫PCR的基礎(chǔ)上，建立了在細(xì)胞或組織原位檢測抗原的原位免疫PCR（in situ immuno-PCR）。

    原位免疫PCR是一種檢測系統(tǒng)，需要一種中介分子同時具有與DNA和抗體分子特異性結(jié)合的能力，其一端連接DNA,另一端連接抗原-抗體復(fù)合物，形成一個抗原-抗體-DNA連接物。作為標(biāo)記的DNA分子用PCR擴(kuò)增，檢測特異的PCR產(chǎn)物，即可間接證明抗原的存在。該技術(shù)與原位PCR不同，就是在PCR與原位雜交之間加了抗體的因素。原位PCR是先對切片或涂片進(jìn)行PCR,以對組織細(xì)胞內(nèi)的DNA或RNA進(jìn)行擴(kuò)增，使其拷貝數(shù)大大增加，然后再進(jìn)行原位分子雜交。而該技術(shù)是先用特異性抗體（單抗）與相應(yīng)或目的抗原反應(yīng)。這個抗體在對抗原反應(yīng)之前加上了人體不存在的或無關(guān)的DNA序列。抗體與抗原特異性反應(yīng)后，用PCR擴(kuò)增加在抗體上的DNA序列，然后再用該DNA序列的探針進(jìn)行雜交檢測，也就是說用PCR及雜交的方法來放大免疫組織化學(xué)的反應(yīng)，檢測目標(biāo)是蛋白質(zhì)。